光學(xué)顯微鏡一般由載物臺(tái)、聚光照明系統(tǒng)、物鏡,目鏡和調(diào)焦機(jī)構(gòu)組成。載物臺(tái)用于承放被觀(guān)察的物體。利用調(diào)焦旋鈕可以驅(qū)動(dòng)調(diào)焦機(jī)構(gòu),使載物臺(tái)作粗調(diào)和微調(diào)的升降運(yùn)動(dòng),使被觀(guān)察物體調(diào)焦清晰成象。它的上層可以在水平面內(nèi)沿作精密移動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng),一般都把被觀(guān)察的部位調(diào)放到視場(chǎng)中心。
聚光照明系統(tǒng)由燈源和聚光鏡構(gòu)成,聚光鏡的功能是使更多的光能集中到被觀(guān)察的部位。照明燈的光譜特性必須與顯微鏡的接收器的工作波段相適應(yīng)。
物鏡位于被觀(guān)察物體附近,是實(shí)現(xiàn)第一級(jí)放大的鏡頭。在物鏡轉(zhuǎn)換器上同時(shí)裝著幾個(gè)不同放大倍率的物鏡,轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器就可讓不同倍率的物鏡進(jìn)入工作光路,物鏡的放大倍率通常為5~100倍。
物鏡是顯微鏡中對(duì)成象質(zhì)量?jī)?yōu)劣起決定性作用的光學(xué)元件。常用的有能對(duì)兩種顏色的光線(xiàn)校正色差的消色差物鏡;質(zhì)量更高的還有能對(duì)三種色光校正色差的復(fù)消色差物鏡;能保證物鏡的整個(gè)像面為平面,以提高視場(chǎng)邊緣成像質(zhì)量的平像場(chǎng)物鏡。高倍物鏡中多采用浸液物鏡,即在物鏡的下表面和標(biāo)本片的上表面之間填充折射率為1.5左右的液體,它能顯著的提高顯微觀(guān)察的分辨率。
目鏡是位于人眼附近實(shí)現(xiàn)第二級(jí)放大的鏡頭,鏡放大倍率通常為5~20倍。按照所能看到的視場(chǎng)大小,目鏡可分為視場(chǎng)較小的普通目鏡,和視場(chǎng)較大的大視場(chǎng)目鏡(或稱(chēng)廣角目鏡)兩類(lèi)。
載物臺(tái)和物鏡兩者必須能沿物鏡光軸方向作相對(duì)運(yùn)動(dòng)以實(shí)現(xiàn)調(diào)焦,獲得清晰的圖像。用高倍物鏡工作時(shí),容許的調(diào)焦范圍往往小于微米,所以顯微鏡必須具備極為精密的微動(dòng)調(diào)焦機(jī)構(gòu)。
顯微鏡放大倍率的極限即有效放大倍率,顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個(gè)物點(diǎn)的最小間距。分辨率和放大倍率是兩個(gè)不同的但又互有聯(lián)系的概念。
光學(xué)顯微鏡當(dāng)選用的物鏡數(shù)值孔徑不夠大,即分辨率不夠高時(shí),顯微鏡不能分清物體的微細(xì)結(jié)構(gòu),此時(shí)即使過(guò)度地增大放大倍率,得到的也只能是一個(gè)輪廓雖大但細(xì)節(jié)不清的圖像,稱(chēng)為無(wú)效放大倍率。反之如果分辨率已滿(mǎn)足要求而放大倍率不足,則顯微鏡雖已具備分辨的能力,但因圖像太小而仍然不能被人眼清晰視見(jiàn)。所以為了充分發(fā)揮顯微鏡的分辨能力,應(yīng)使數(shù)值孔徑與顯微鏡總放大倍率合理匹配。
聚光照明系統(tǒng)是對(duì)顯微鏡成像性能有較大影響,但又是易于被使用者忽視的環(huán)節(jié)。它的功能是提供亮度足夠且均勻的物面照明。聚光鏡發(fā)來(lái)的光束應(yīng)能保證充滿(mǎn)物鏡孔徑角,否則就不能充分利用物鏡所能達(dá)到的最高分辨率。為此目的,在聚光鏡中設(shè)有類(lèi)似照相物鏡中的 ,可以調(diào)節(jié)開(kāi)孔大小的可變孔徑光闌,用來(lái)調(diào)節(jié)照明光束孔徑,以與物鏡孔徑角匹配。
改變照明方式,可以獲得亮背景上的暗物點(diǎn)(稱(chēng)亮視場(chǎng)照明)或暗背景上的亮物點(diǎn)(稱(chēng)暗視場(chǎng)照明)等不同的觀(guān)察方式,以便在不同情況下更好地發(fā)現(xiàn)和觀(guān)察微細(xì)結(jié)構(gòu)。
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